تأثير حمض الجبريليك على تحرير إنزيم ألفا أمايليز من بذور الشعير Effect of gibberellin
من المعروف أن الهرمونات النباتية لها تأثير على العمليات الفسيولوجية في النبات وذلك حسب نوع الهرمون ولقد وجد أن هرمون حمض الجبريليك له دور في استحثاث إنتاج إنزيم ألفا أمايليز -Amylaseά والذي يقوم بتحليل النشا الموجود في بذور نبات الشعير , والجزء المسئول عن إنتاج هرمون حمض الجبريليك GA3 هو الجنين في بذرة الشعير والذي ينتشر إلى طبقة الإندوسبيرم فيقوم بتحفيز إنزيم ألفا أمايليز وإنزيمات أخرى .
المواد والأدوات اللازمة :
ثمانية أطباق بتري معقمة – 50 حبة شعير – قطعة شاش – كأس سعة 250 ملل – ماء مقطر معقم – كحول إيثيلي 95 % - مشارط – ملاقط – ماصات معقمة – بيئة آجار النشا .
خطوات العمل :
1- رقم أطباق بتري من 1 – 7 مع ضرورة العمل ضمن ظروف التعقيم.
2- ضع في كل طبق 1 ملل من الكلورامفينيكول بتركيز 0.3 ملجرام / ملل مع ملاحظة عدم تلوث الأطباق .
3- ثم أضف المواد التالية كما يلي :
الطبق رقم 1 embryo containing half seeds in water ( نصف حبة شعير محتوية على الجنين في الماء )
الطبق رقم 2 embryoless half seeds in water ( نصف حبة شعير غير محتوية على الجنين )
الطبق 3 emberyoless half seeds in 10 μl GA3
الطبق 4 emberyoless half seeds in 100 μl GA3
الطبق 5 emberyoless half seeds in 10 μl GA3 and cycloheximide
الطبق 6 emberyoless half seeds in 1 l GA3
الطبق 7 emberyoless half seeds in 1 l GA3and cycloheximide
4- أضف 15 مل من الوسط الغذائي لكل طبق وحركها حركة رحوية مرة مع عقارب الساعة ومرة عكس عقارب الساعة لخلط محتويات الطبق .
5- ضع البذور في دورق به محلول كلوركس 5 % مع التحريك من حين لآخر لمدة 10 دقائق لتعقيم البذور .
6- غط الدورق بقطعة الشاش ثم تخلص من الكلوركس ثم اغسل البذور عدة مرات بماء مقطر معقم وتخلص من الماء بنفس الطريقة .
7- خذ 36 حبة في طبق بتري به ما مقطر معقم وباستخدام ملقط ومشرط معقمين بالكحول قم بقص ست بذور قصاً مستعرضاً إلى نصفين بحيث يحتوي النصف الأول على الجنين والنصف الآخر لا يحتوي على الجنين ومن الضروري جداً العمل تحت اللهب لتفادي التلوث .
8- انقل أنصاف البذور المحتوية على الجنين باستخدام ملقط معقم إلى الطبق رقم 1 ولتكن جهة القطع ملامسة لسطح الوسط الغذائي وكل نصف بعيد بمسافة مناسبة عن حافة الطبق . ثم قم بنقل الأنصاف غير المحتوية على الجنين إلى الطبق رقم 2 بنفس الطريقة .
9- اقطع البذور المتبقية بنفس الطريقة واستبعد الأنصاف المحتوية على الجنين إلى الأطباق 3 و4 و 5 و 6 و 7 .
10- ضع الأطباق في المعمل لمدة 5 أيام .
11- حضر 1 جم من اليود I2 مع 2 جم من يوديد البوتاسيوم KI2 في لتر ماء مقطر .
12- رش محلول اليود على سطح الطبق ولاحظ مناطق رائقة حول أنصاف البذور دلالة على تحلل النشا في الوسط الغذائي بفعل إنزيم الأمايليز الذي تنتجه البذور .
13- لاحظ هذه المناطق على الطباق جميعها .
وللمزيد يرجى زيارة الرابط التالي
http://tamaeoz.blogspot.c
